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? 通蔚生物實驗室中細胞劃痕實驗常見的問題解答
更新時間:2024-01-18   點擊次數:441次

劃痕實驗是觀察掌握細胞遷移實驗過程中細胞活動的重要實驗方法

問題一:細胞劃痕實驗為什么這么重要

答:因為細胞劃痕實驗是觀察細胞遷移活動的重要技術手段,而且簡單快捷、經濟實惠(劃重點)。


問題二:細胞劃痕實驗為什么一般選擇6孔板

答:因為6孔板大小適中,可保證有相當距離的平直劃痕,便于觀察;當然若是需要高通量初篩時,也可以用12或者24孔板。


問題三:為什么細胞接種密度要求過夜100%融合

答:如果過夜后細胞=沒有100%融合,雖然可以適當延長培養時間,但因細胞密度已經很大,所以細胞狀態會逐漸變差,后續細胞可能不遷移而是凋亡。


問題四:怎樣避免細胞增殖對細胞遷移實驗造成的假陽性結果

答:操作如下:

1、使用無血清或低血清培養基(<2%)可降低細胞增殖對實驗結果的影響

2、一般認為24h為細胞的一個周期,在選取合適的時間點(6,12,24h)檢測劃痕寬度時,不要超過細胞一個周期的時間。


問題五:結果怎樣拍照

答:按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,劃痕一次與5條定位線相交,就有10個可固定監測點,以解決了前后觀察時位置不固定的問題。


問題六:細胞不遷移怎么回事

答:避開細胞狀態的影響,需要考慮細胞自身的遷移能力,并非所有細胞都適合劃痕實驗。


問題七:結果統計中,細胞計數和統計面積那個好用

答:根據細胞劃痕實驗的實驗結果選擇。如果細胞遷移輪廊比較清晰,并且遷移數量不多,我們可以選擇細胞計數;但如果細胞數比較多,連片生長,那么統計面積比細胞計數的方式更簡便且客觀。


問題八:細胞劃痕技術有什么不足嗎

答:細胞劃痕實驗的不足主要包括:

1、適用的細胞類型范圍小,一是需要遷移強的細胞,而且對無血清的環境有較強的忍受力(至少24h)12h細胞凋廣就超過50%。

2、自身操作的實驗誤差,如劃痕距離不一致等。


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